本发明属于猪遗传标记制备与应用技术领域，具体涉及一种猪ｍｉＲ－２７ａ前体侧翼基因片段作为猪产仔数性状的遗传标记，其制备方法与应用。本发明获得了一种与猪产仔数性状相关的遗传标记，它包含猪ｍｉＲ－２７ａ前体侧翼基因片段，它是序列表ＳＥＱ?ＩＤ?ＮＯ：１、ＳＥＱ?ＩＤ?ＮＯ：２、ＳＥＱ?ＩＤ?ＮＯ：３、ＳＥＱ?ＩＤ?ＮＯ：４和ＳＥＱ?ＩＤ?ＮＯ：５所示的核苷酸序列；在序列表ＳＥＱ?ＩＤ?ＮＯ：１、ＳＥＱ?ＩＤ?ＮＯ：２、ＳＥＱ?ＩＤ?ＮＯ：３、ＳＥＱ?ＩＤ?ＮＯ：４和ＳＥＱ?ＩＤ?ＮＯ：５序列的４６１ｂｐ处有一个Ｃ４６１－Ｔ４６１的碱基突变，该突变导致ＰＣＲ－ＨｐａＩＩ－ＲＦＬＰ多态性。设计了扩增ｍｉＲ－２７ａ前体侧翼基因片段的引物，其核苷酸序列如ＳＥＱ?ＩＤ?ＮＯ：６和ＳＥＱ?ＩＤ?ＮＯ：７所示。本发明公开了该遗传标记的制备方法及其在猪标记辅助选择中的应用。