乳酸菌发酵液体饲料对仔猪生长性能、粪样菌群及血液生化指标的影响
摘要：试验旨在研究乳酸菌发酵液体饲料对仔猪生长性能、粪样菌群和血液生化指标的影响。选用体重相近的150头体重20kg左右的三元杂交仔猪,对照组（Ⅰ组）饲喂基础日粮，试验组（Ⅱ组）饲喂含抗生素的基础饲料日粮，试验组(Ⅲ组)饲喂乳酸菌液体发酵饲料。结果表明，与对照组相比，饲喂乳酸菌发酵液体饲料仔猪的平均日增重和平均日采食量明显增加(P<0.05)，显著降低了仔猪的发病率(P<0.05)；鲜粪中大肠杆菌和沙门氏菌的数量显著降低，乳酸菌的数量显著增加(P<0.05)；显著提高了血液中总蛋白、白蛋白、免疫球蛋白G、葡萄糖的含量(P<0.05)，显著降低了血液中尿素氮的含量(P<0.05)。
随着人们生活水平的日益提高以及人们对食品安全、健康、环保等问题的关注度的提高,抗生素的滥用、残留和耐药性等关乎安全的关键问题重视度也明显提高。自从禁止在动物饲料中添加抗生素以来，研究人员开始探寻其他可以替代抗生素的技术和产品，使畜牧业的生产不受到影响。在整个养猪过程中难度最大且复杂的环节是仔猪生长阶段，此阶段抗生素的使用呈普遍现象，虽然在国家各种政策的大力影响下有所改观,但形势仍然严峻。近年来,一些试验研究发现，将饲料进行适当的处理及加工，可以在一定程度上降低仔猪对饲料及环境过敏的应激反应,进而减缓仔猪应激综合症，所以研发应用于仔猪的发酵饲料意义非凡。
发酵液体饲料（Fermented Liquid Feed, FLF）是一种环保、绿色的生物饲料，已经广泛应用于欧洲等地，它有着与抗生素相同的作用，已经有试验充分证明了FLF在仔猪上的优势。经国内外研究者发现，饲料原料经过发酵后会有益生菌、酶、乳酸、代谢产物、维生素、蛋白质分解产物的产生，具有酸香气味，适口性好，动物喜食，经乳酸菌发酵的饲料，大部分抗营养因子被消除，营养更加丰富，饲喂畜禽后可抑制肠道有害菌的生长，有效防止畜禽多种疾病的发生，维持动物肠道的菌群平衡进而改善动物生长性能的作用。在发酵过程中不添加抗生素，所以在动物体内不会造成抗生素药物的残留，研发FLF对我国畜牧业的发展意义重大。
目前，国内关于乳酸菌FLF在仔猪应用效果的研究报道还少之甚少，本研究主要是利用乳酸菌发酵液体饲料为研究对象，探究将FLF应用在仔猪阶段饲喂后，仔猪的日采食量、日增重、料重比等生长性能改善情况，对肠道健康和对血液生化指标是否有改善作用，为乳酸菌FLF在生猪无抗养殖应用生产中替代抗生素提供试验理论依据，为进一步研发安全、高效、环保的发酵饲料奠定了理论基础。
材料和方法
1 试验设计及基础日粮
2019年5月5日~6月8日在信阳罗山县鑫隆家庭农场养猪场进行了应用试验，预试期5d，试验期30d。选用体况良好的150头约重20kg的“杜×长×大”健康仔猪，按要求随机分为3组，每组5个重复。Ι组饲喂基础日粮作为对照试验，试验Ⅱ组饲喂基础饲料日粮添加5%金霉素的预混剂，试验Ⅲ组饲喂乳酸菌FLF。平均每舍饲喂试验猪10头，每天定时对猪舍通风换气，温度为15~20℃，日常定时打扫猪舍2次，其他日常管理按常规进行。基础日粮组成及营养水平见表1。
2 发酵饲料
2.1 试验菌种
植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）UR-3是由河南省科学院生物研究所有限责任公司通过紫外诱变得来，现保存于中国微生物菌种保藏中心。
2.2 乳酸菌发酵液体饲料生产工艺
试验过程中，河南省科学院生物研究所有限责任公司提供本研究所用的FLF，主要使用30kg桶装式进行液体发酵，主要提供于养殖场和应用试验的研究。发酵过程中所用的桶自带排气阀，密封性好,可保质一个月。乳酸菌FLF是将基础日粮中的玉米：豆粕和麸皮水都按1：2的比例放入发酵桶中进行发酵，每桶总质量30kg，接入UR-3种子液1800ml，常温发酵48~72h，饲喂前每桶按基础日粮配方干物质的量添加4%的仔猪预混料，最后制成Ⅲ组的饲喂日粮。发酵前后，乳酸菌发酵液体饲料营养成分变化显著，粗蛋白、生物量和乳酸含量都显著高于尚未发酵的发酵液体饲料，具体营养成分价值分析参照参考文献，此乳酸菌FLF的pH值≤4.0，且有浓郁的酸香味时即可饲喂。
3 生长性能的测定
分别在试验阶段的第0d和第30d的清晨，将试验仔猪逐头空腹称重，以每重复组为单位，记录体重，计算饲喂期间仔猪的平均日增重（ADG）。
每天记录每个猪圈的投料量和饲喂结束的剩余量得到总的采食量，计算试验期间仔猪的平均日采食量（ADFI）和料重比(F/G)。
4 粪样菌群
4.1 样品采集
在试验进行的第20d和第30d清晨，每个重复随机选2头健康仔猪，采集其新鲜无污染微生物粪便，放冰箱-20℃待测。
4.2 粪样的稀释
在无菌条件下，称取1g粪样放入加有9ml磷酸盐缓冲液的试管内，放玻璃珠进行震荡使粪便均质化，振荡器中振荡5min后制成10-1稀释液，随后将此稀释液加入放有9ml无菌磷酸盐缓冲液的试管中制成10-2稀释液，再次在振荡器中振荡5min，依此分别进行10-3~10-6倍的稀释液的制备。
4.3 培养及菌落计数
大肠杆菌：在EMB固体培养基上接入粪样稀释液，37℃、24h培养后分别进行生理生化鉴定和平板计数。沙门氏菌：在SS固体培养基上接入粪样稀释液，37℃、24h有氧培养后进行平板计数。乳酸菌：在MRS固体培养基上接入粪样稀释液，37 ℃、48h厌氧培养后进行平板计数。
5 发病率
对仔猪的每日采食量、粪便质量、发病数量、死亡量、腹泻情况、精神状况和仔猪肛门污染状况等进行密切观察和记录，包括仔猪出现感冒、发热、关节肿痛、咳嗽、皮肤出现异常等常见病也要记录在案。发病率(%)=总发病头次数总头数×试验天数×100
6 血液生化指标
6.1 血清的制备
试验完成的倒数第二天，将试验仔猪禁饲12h，这期间自由饮水。随机选1头健康接近平均体重的仔猪，颈静脉采血，常温静置15min后进行血清的分离，用离心机4000r/min离心5min，保存于-20℃冰箱。
6.2血液生化指标测定
先解冻血清，再采用血液生化分析仪测定血清中的总胆固醇、三酰甘油、总蛋白、葡萄糖的等指标含量；用免疫透射比浊法测定血清中免疫球蛋白A、免疫球蛋白G和免疫球蛋白M的指标含量。
7 数据处理
用DPS软件进行数据方差分析。
结果
1 乳酸菌FLF对仔猪生长性能的影响（见表2）
由表2可知，各组仔猪初始体重差异不显著；但在试验结束时，与对照组相比，Ⅱ组和Ⅲ组的末重明显增加，分别提高了7.95%(P<0.05)和8.17%(P
2 乳酸菌FLF对仔猪粪样菌群的影响（见表3）
从表3可知，与对照组相比，Ⅱ组和Ⅲ组粪样中大肠杆菌的数量分别降低了45.10%(P<0.05)和46.46%(P<0.05)；沙门氏菌的数量分别降低了78.57%(P<0.05)和84.87%(P<0.05)；Ⅲ组的乳酸菌的数量显著提高(P<0.05)。
3 乳酸菌FLF对仔猪发病率的影响（见表4）
如表4所示，试验过程中无试验猪死亡。与对照组相比，Ⅱ组和Ⅲ组的发病率分别显著降低了68.36%(P<0.05)和71.35(P<0.05)，Ⅱ组与Ⅲ组之间的差异显著(P<0.05)。
4 乳酸菌FLF对仔猪血液生化指标的影响(见表5)
由表5的血液生化指标可以得出，三组试验血样中总胆固醇、三酰甘油和免疫球蛋白M含量差异不显著(P>0.05)。与对照组相比，Ⅱ组和Ⅲ组血样中总蛋白、白蛋白、免疫球蛋白G指标明显提高，差异显著(P<0.05)，且Ⅱ组与Ⅲ组间差异显著( P<0.05)。与对照组相比，Ⅱ组和Ⅲ组血样中尿素氮含量明显降低，差异显著(P<0.05)，而且Ⅱ组与Ⅲ组间差异显著(P<0.05)；Ⅱ组和Ⅲ组血样中葡萄糖含量明显提高，差异显著(P<0.05)，且Ⅱ组与Ⅲ组间差异显著(P<0.05)。
讨论
从试验测定的仔猪生长性能一系列指标如：平均日增重、平均日采食量、料重比以及发病率等来看，试验Ⅲ组乳酸菌FLF的试验效果最好，不但提高了仔猪平均日增重和平均日采食量，而且明显降低了料肉比和发病率。把固体饲料制成液体饲料，可以分解、软化固体饲料，减少了仔猪胃肠道刺激，这样可以使仔猪对饲料原料中营养物质的消化和吸收速度加快，进一步提高了仔猪的采食量。
由于仔猪的食物由母乳转为固态所造成的一系列应激反应，当饲喂仔猪液体饲粮后，可以有效降低并防止仔猪机能的紊乱，并保护了仔猪的胃肠道，降低腹泻率，还能降低固体饲料粉末刺激仔猪呼吸道的几率，从而降低动物的呼吸道发病率，进而提高成活率。但液体饲料也存在一些弊端，如液体饲料增加了环境湿度，猪场的卫生环境难度加大；另外料槽内余下的液态饲料易霉变，极易发生仔猪中毒或感染腹泻，所以勤清扫饲槽是十分有必要的。
FLF作为新型的绿色饲料，比固体饲料或一般的液体饲料更具明显的优势，虽然益生菌FLF还存在着质量不稳定，使用范围小，使用效果不均一等方面的问题，而且当前FLF尚处在初期探索研究阶段，也仅仅局限于断奶仔猪应用阶段，但我们有理由相信，随着FLF加工设备的不断发展，生产技术的不断完善，只要解决了加工控制、菌种选择和饲喂系统等问题，FLF必将是理想的抗生素促生长因子替代品。FLF的普及应用会进一步快速提高畜牧业的生产水平，为绿色畜产品的生产提供有力的支持。
综上，本试验结果可能与FLF产生作用效果的机理有关：经乳酸菌发酵的饲料，营养更丰富，含有丰富的乳酸菌及其代谢产物、乳菌素、小肽和维生素等，呈酸性，具有酸香气味，适口性好，动物喜食，提高了动物的日采食量和日增重，从而提高仔猪的生长性能；饲喂畜禽后可抑制肠道有害菌的生长，乳酸菌数量大量增加，可以在动物肠道内大量定植，有效调整肠道菌群平衡，可分泌乳酸，并产生多种消化酶，帮助食物消化和代谢，促进营养质的吸收和利用，进一步增强了动物机体的免疫力，而且改善了仔猪的肠道健康并预防动物的腹泻。
结论
本试验表明，与对照相比饲喂乳酸菌FLF的仔猪的末重提高了8.17%，平均日增重提高了16.12%，平均日采食量提高了8.91%，料肉比降低了6.20%，同时也可以降低仔猪发病率,提高仔猪血液中总蛋白、白蛋白、免疫球蛋白G、葡萄糖的含量，降低血液中尿素氮的含量。可见，FLF不仅可以使仔猪的应激反应减少、采食量增加，而且可以提高仔猪的生长速度和成活率，进而降低养殖成本。因此，FLF作为一种高效、绿色、生态和安全的饲料具有在各类养猪场推广应用的潜力。
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