1.1 试验材料

青贮原料为来自山东省阳信县河流镇蜡熟期刈割的全株玉米(登海605)，全株玉米青贮前营养成分见表1。乳酸菌制剂主要成分为戊糖片球菌、屎肠球菌、植物乳杆菌和布氏乳杆菌，乳酸菌含量为5×1010CFU/g。甲酸、乙酸、丙酸、苯甲酸钠和山梨酸钾均为实验室用分析纯试剂，购自国药集团化学试剂有限公司。纤维素酶(绿色木酶，又称1，4-β-D-葡聚糖葡糖苷水解酶，活性为400000U/g)购自上海源叶生物科技有限公司。聚乙烯单向呼吸阀厌氧袋(22cm×40cm)购自平阳胜光实业有限公司。

1.2 试验设计

全株玉米用粉碎机切短至1～2cm，混合均匀后备用。试验共设5个组，分别为对照组(不添加任何青贮添加剂)、乳酸菌组(添加5×105CFU/g乳酸菌制剂)、有机酸组(甲酸、乙酸和丙酸按照7∶1∶2的体积比进行混合，添加量为4mL/kg)、有机酸盐组(苯甲酸钠和山梨酸钾按照1∶1的质量比进行混合，添加量为2g/kg)和纤维素酶组(添加50mg/kg纤维素酶)，添加剂的添加量均以青贮鲜重为基础，每组4个重复。各组混合均匀后，称取约1kg样品于聚乙烯厌氧袋中，真空密封，于室温避光发酵45d后开袋取样，随后开展相关指标的测定。

1.3 指标测定

1.3.1 常规营养成分指标

全株玉米青贮前和开袋后分别取约500g样品，在65℃烘箱(DHG－9053A型)中烘干48h，采用粉碎机(Tecator 1093，瑞典)粉碎至1mm待测。干物质(DM)、粗灰分(Ash)、粗蛋白质(CP)和粗脂肪(EE)含量参照AOAC(2005)方法进行测定，其中DM含量采用重量法测定，Ash含量含量采用灰化法测定，CP含量采用凯氏定氮法测定，EE含量采用索氏浸提法(乙醚浸出法)测定。

钙(Ca)含量参照GB/T 6436—2018，采用高锰酸钾法测定。磷(P)含量参照GB/T 6437—2018，采用分光光度法测定。中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)和酸性洗涤木质素(ADL)含量参照Van Soest等的方法，采用Ringbio纤维分析仪(R－2000，英国)测定。水溶性碳水化合物(WSC)含量参照蒽酮－硫酸比色法，采用分光光度计(Alpha－1506，上海)进行测定。淀粉(Starch)含量采用高氯酸水解－蒽酮比色法测定。相对饲喂价值(RFV)根据公式进行计算:

RFV=DMI(%BW)×DDM(%DM)/1.29;

DMI(%BW)=120/NDF(%DM);

DDM(%DM)=88.9－0.779×ADF(%DM)。

式中:DMI为干物质采食量;BW为体重;DDM为可消化干物质。

1.3.2 碳水化合物组分指标

碳水化合物组分剖分参照NＲC(2016)的方法，各组分计算公式如下:

总碳水化合物(CHO，%DM)=100－CP(%DM)－EE(%DM)－Ash(%DM);

非中性洗涤纤维性碳水化合物(Non－NDF，%DM)=100－CP(%DM)－NDF(%DM)－EE(%DM)－Ash(%DM);

有机酸(OA，%DM)=乳酸(%DM)+乙酸(%DM)+丙酸(%DM)+丁酸(%DM)+其他有机酸(%DM);

不可利用纤维(CC，%DM)=ADL(%DM)×2.4;

可溶性糖(CA，%DM)=WSC(%DM);

淀粉(CB1，%DM)=Starch(%DM);

中性洗涤可溶纤维(CB2，%DM)=Non－NDF(%DM)－OA(%DM)－CA(%DM)－CB1(%DM);

不可利用中性洗涤纤维(CC，%DM)=2.4×ADL(%DM);

可利用中性洗涤纤维(CB3，%DM)=NDF(%DM)－CC(%DM)。

1.3.3 预测能值指标

总可消化养分(TDN)根据Weiss等的方法计算，计算公式如下:

TDN(%)=0.98×(100－NDFn－CP－Ash－EE)+0.93×CP+2.25×(EE－1)+0.75×(NDFn－ADL)×［1－(ADL/NDFn)0.667］－7;

式中:NDFn为无氮中性洗涤纤维［NDFn=NDF－中洗不溶蛋白(NDICP)］;各组分的单位均为%DM。

消化能(DE)、代谢能(ME)、维持净能(NEm)和增重净能(NEg)参照NＲC(2016)，在TDN基础上进行计算，公式如下:

DE(MJ/kg)=0.04409×TDN(%DM);

ME(MJ/kg)=0.82×DE(MJ/kg);

NEm(MJ/kg)=1.37×ME(MJ/kg)－0.138×ME2(MJ/kg)+0.0105×ME3(MJ/kg)－1.12;

NEg(MJ/kg)=1.42×ME(MJ/kg)－0.174×ME2(MJ/kg)+0.0122×ME3(MJ/kg)－1.65。

泌乳净能(NEL)根据Undersander的方法进行计算，公式如下:

NEL(MJ/kg)=［0.9265－(0.00793×ADF)］/0.4536。

1.3.4 发酵指标

称取25g新鲜青贮样品，置于榨汁机(HR2027，飞利浦)中，加入250mL无菌蒸馏水，间歇榨汁搅拌5～6次，每次5s。用4层纱布过滤上清液至三角瓶中，混匀，立即使用pH计(HANNA HI 9125，意大利)测定pH，随后使用0.1mol/LHCl滴定至pH为3.0，然后用0.1mol/LNaOH滴定至pH为10.0，缓冲力(BC)按照pH每变化0.5个单位所消耗0.1mol/LNaOH的体积进行计算;另取滤液于－20℃冰箱保存，用于后续测定挥发性脂肪酸(VFA)、乳酸和氨态氮(NH3-N)含量。

VFA含量采用气相色谱法测定;乳酸含量采用对羟基联苯比色法测定;NH3-N含量采用苯酚－次氯酸钠比色法测定。参照王国艮的方法计算发酵系数(fermentation coefficient，FC)和费氏评分(Fleig score，FS)，公式如下:

发酵系数=DM(%)+8×WSC(%DM)/BC;费氏评分=220+［2×DM(%)－15］－(40×pH)。

1.3.5 瘤胃降解率指标

选用3头体况良好、体重(550±50)kg、安装永久性瘤胃瘘管的荷斯坦奶牛，试验饲粮组成(DM基础)为:玉米24.1%、麸皮12.3%、豆粕11.6%、苜蓿14.4%、羊草11.2%、全株玉米青贮24.4%、预混料2%;营养水平为:CP15.03%、NDF38.13%、ADF20.15%、NEL6.49MJ/kg，每天于06:00和18:00进行饲喂，全天自由饮水。

采用尼龙袋法测定青贮饲料24和48h的干物质降解率(DMD)和中性洗涤纤维降解率(NDFD)。尼龙袋规格为12cm×6cm，孔径为50μm，称量3g左右青贮样品装入尼龙袋中，每个样品每个时间点每头牛设置4个重复，尼龙袋取出后，使用自来水冲洗干净，在65℃烘箱中烘干48h，采用粉碎机粉碎至1mm，后续测定DM和NDF含量，计算降解率，公式如下:

DMD(%)=［(消化前样品DM含量－消化后样品DM含量)/消化前样品DM含量］×100;

NDFD(%)=［(消化前样品NDF含量－消化后样品NDF含量)/消化前样品NDF含量］×100。

1.3.6 营养价值综合评价

采用模糊数学隶属函数法对青贮营养价值进行综合评价，如果测定的指标与青贮的营养价值呈正相关，计算公式如下:

R(Xi)=(Xi－Xmin)/(Xmax－Xmin)。

如果为负相关，则用反隶属函数进行转换，计算公式如下:

R(Xi)=1－(Xi－Xmin)/(Xmax－Xmin)。

式中:R(Xi)为指标测定值，Xmin和Xmax分别为某一指标所有测定值中的最小值和最大值。

对所有指标隶属函数值进行相加，求其平均值，以平均值大小进行排名。

1.4 统计分析

数据使用Excel 2013进行汇总和整理，使用SAS 9.1软件中GLM过程进行方差分析和Duncan氏法多重比较检验，结果以最小二乘均值表示，P＜0.05为差异显著，0.05≤P＜0.10为存在趋势。

3.2 不同青贮添加剂对全株玉米青贮发酵品质的影响

青贮pH、乳酸含量和NH3-N/TN是衡量青贮饲料发酵品质的重要指标。优质青贮饲料的pH应在4.2以下，NH3-N/TN低于10%，乳酸含量在4%～6%。本试验中，对照组青贮的各项指标均达到优质青贮饲料的要求，表明全株玉米青贮是一种较易获得高品质青贮饲料的原料，主要与其高WSC含量和附生乳酸菌数量较大有关。

尽管如此，本试验添加不同青贮添加剂均可进一步提升青贮饲料的发酵品质，不同程度地提升了乳酸含量，降低了pH和NH3-N/TN，其中，乳酸菌组提升乳酸含量的能力强于有机酸组，原因主要与二者调控青贮发酵的模式不同有关，乳酸菌作为青贮发酵促进剂，增加了乳酸菌的数量，进而促进WSC被乳酸菌利用而产生大量的乳酸，而有机酸作为青贮发酵抑制剂，直接酸化青贮饲料来抑制有害微生物的活动，保留饲料营养价值和改善发酵品质的同时，会对乳酸菌的活动造成影响。李悦铭等在小麦青贮中添加不同浓度的甲丙混合酸，随着甲丙混合酸浓度的增加，乳酸含量显著线性降低。而薛春胜等在苜蓿青贮中添加甲酸显著提升了青贮乳酸含量。

因此，应用有机酸作为青贮添加剂，使用前应需根据饲草的属性筛选出适宜的添加量。NH3-N/TN是反映青贮过程中蛋白质降解程度的指标，其含量直接影响饲料的适口性和营养价值，NH3-N/TN越高则表明蛋白氮降解越多，青贮发酵品质越差。本试验中，有机酸盐组和有机酸组的NH3-N/TN较对照组显著降低，与DaSilva等的结果一致，表明有机酸及其盐对青贮饲料蛋白质具有较强的保护能力。费氏评分作为评估青贮饲料质量优劣的标准之一，主要由青贮DM和pH计算得出，由于各组的DM含量无显著差异，因此，本研究中费氏评分的变化规律与pH一致。

3.3 不同青贮添加剂对全株玉米青贮瘤胃降解率的影响

青贮饲料的DM和NDF瘤胃降解率是影响反刍动物干物质采食量(DMI)的重要因素。目前，有关青贮添加剂对青贮饲料瘤胃DMD和NDFD影响的结果存在分歧，本试验中，有机酸盐组和纤维素酶组的DMD24h和NDFD24h较对照组显著增加，且纤维素酶组最高，而乳酸菌组和有机酸组的DMD和NDFD与对照组无显著差异。但刘帅等添加乳酸菌提高了全株玉米青贮DM和NDF的有效降解率。苗树君等和万江春等研究表明，添加乳酸菌分别提高了玉米秸秆和棉花秸秆的NDFD。

李悦铭等研究表明，添加甲丙混合酸增加了小麦青贮的DMD和NDFD。通过分析发现，青贮饲料DMD和NDFD与其NDF含量密切相关，以上研究中，青贮添加剂提升DMD和NDFD的同时，NDF含量均显著降低。相比之下，纤维素酶对DMD和NDFD的影响研究结果较为一致。万江春等研究发现，添加纤维素酶分别增加了玉米秸秆和草原天然牧草青贮的NDFD，与本试验结果一致，主要原因是纤维素酶可水解植物细胞壁为单糖，改变其纤维素结构并降低纤维含量。因此，添加纤维

4结 论