1.2 试验材料

枯草芽孢杆菌：经过包埋处理，活菌数≥5×108CFU／g，山东宝来利来生物工程股份有限公司提供；紫锥菊提取物：地上部分茎、叶、花的提取物，粉样，含4％多酚，西安锐博生物科技有限公司提供。

1.3 饲养管理

试验所用羔羊均来自定西旺盛养殖有限公司，采用舍饲方式分栏饲养，试验前1周，打扫清理羊舍，并对羊舍、羊栏、食槽等进行消毒。试验开始前，试验羊逐个称重、打耳标、药浴和驱虫(驱虫后48h内彻底打扫羊舍)。然后将试验羊分组，单栏饲养，羊栏长3．0m，宽2.5m，准备饮水和采食一体的食槽，每天喂料2次，时间为07：30、16：30，自由饮水。试验羊舍为彩钢半开放式羊舍，温度、光照、通风等饲养环境条件一致。

1.4 测定指标与方法

1.4.1 生长性能

试验期间以重复为单位记录每天投料量、剩料量、腹泻数(每天08：00观察粪便，粪便分为正常、稀软、黏稠、水样和血便5个等级，后4个等级均判断为腹泻，记录腹泻日只数)，正试期每20d称羔羊个体空腹活重(试验开始及结束时连续2d称重)，计算羔羊平均日增重(average daily gain，ADG)、平均日采食量(average daily feed intake，ADFI)和干物质采食量(dry matter intake，DMI)、料重比(feed／gain，F／G)、腹泻率(diarrhea ratio)。

腹泻率(％)=[腹泻只数／(试验只数×试验天数)]x100。

1.4.2 养分的表观消化率

在正试期第31～35天，进行为期5d的消化试验，利用粪袋收集每天的粪样并称重，充分混匀后取150g，平均分为3份：一份在105℃烘干，用于测定干物质含量；一份加入10％硫酸用以保存氨氮，在冰箱中冷冻保存备用；最后一份装入铝盒在65℃烘干至恒重，测定干物质含量，磨碎过40目网筛，贮存于广口瓶中，然后将5d的粪样全部混合并充分混匀，经粉碎后按四分法取样200g。同时记录每天每只羊采食量及干物质的采食量，每组每天采集饲料样品200g，测定粪样和饲料样品的干物质、粗脂肪、粗蛋白质、中性洗涤纤维及酸性洗涤纤维含量，具体测定方法参考张丽英编著的《饲料分析及饲料质量检测技术》。

1.4.3 血清生化指标

正试期最后l天08：00，所有试验羊只空腹静脉采血10mL于未加抗凝剂的离心管中，待其凝固后2312xg离心10min，吸取上清液于EP管中，置于-80℃冻存，测定生化指标时。冻存血清取出在37℃水浴中解冻，按照试剂盒说明书的剂量要求吸取血清样本用全自动生化分析仪(BX一3010，希森美康医用电子有限公司，日本)测定碱性磷酸酶活性及总蛋白、白蛋白、球蛋白、尿素氮、甘油三酯、葡萄糖浓度，碱性磷酸酶活性测定采用国际临床化学联合会(IFCC)建议的动力法，总蛋白浓度测定采用双缩脲比色法，白蛋白浓度测定采用溴甲酚绿(BCG)比色法，球蛋白浓度为总蛋白和白蛋白浓度之差，尿素氮浓度测定采用酶偶联速率法，甘油三酯浓度测定采用葡萄糖氧化酶一过氧化物(GOD-POD)酶比色法，葡萄糖浓度测定采用葡萄糖氧化酶法，各指标具体操作方法参考试剂盒说明，试剂盒均为广东番禺区华鑫科技有限公司生产的通用型生化分析试剂盒。

1.4.4 器官指数、屠宰性能及肉品质

试验结束后，从每组中随机选择3只健康且体重相近的试验羊进行屠宰，宰前24h禁食，2h禁水，空腹称重后采用伊斯兰法(大抹脖法)屠宰剥去毛皮、头、四肢、内脏(保留肾及肾周脂肪)，静置30min后称重胴体，计算屠宰率，公式如下：

屠宰率(％)=(胴体重／宰前活重)X100

同时，剥离肝脏、脾脏、心脏、肺脏，用吸水纸吸干各器官表面多余水分并称重，计算各器官指数，公式如下：

器官指数(％)=(器官重量／宰前活重)x100。

参考赵有璋的方法，用硫酸纸描出第12一13肋骨之间脊椎上眼肌的横截面积，用求积仪测定眼肌面积，然后用游标卡尺测定第12与13肋骨之间距离背脊中线11cm处的组织厚度，即GR值。取右侧第5～10肋骨之前的背最长肌带回实验室，在2h内测定pH、剪切力，取3次测量的平均值，同时，用圆形取样器(直径2．532cm)取厚度为1cm的背最长肌1块，称重后肉样上、下各铺18层中性滤纸，然后置于2块塑料垫板中间，加压至35kg，保持5min，撤除压力后称重，计算失水率，公式如下：

失水率(％)=[(肉样压前重量一肉样压后重量)／肉样压前重量]×100。

取100g左右腰大肌称重后，用2000W的电炉蒸煮45min，取出吊挂冷却30min后称重，计算熟肉率，公式如下：

熟肉率(％)=(肉样蒸煮后重量／肉样蒸煮前重量)×100。

取右侧第11一13肋骨背之间的最长肌真空包装，保存于一20℃，用于常规营养成分测定，常规营养成分参考《肉与肉制品总脂肪含量的测定》(GB/T 9695．7—2008)、《肉与肉制品水分含量的测定》(GB/T 9695．15—2008)、《肉与肉制品氮含量的测定》(GB／T 9695．11—2008)。

1.5 数据处理与统计分析

试验数据采用SPSS19．0进行统计分析。采用one—way ANOVA程序进行方差分析，采用最小显著差数(LSD)法进行多重比较，显著水平设为P<0．05，试验数据表示为平均值±标准差。

2 结果与分析

2.1 枯草芽孢杆菌和紫锥菊提取物对育肥羊生长性能的影响

由表2可知，试验羊育肥中期(21～40d)增重最快，平均日增重均达到250g/d以上，其次是育肥前期(1—20d)，平均日增重均达到228g/d以上，育肥后期(41—60d)增重较慢，整个试验期，对照组、紫锥菊组、枯草芽孢杆菌组育肥羊平均日增重无显著差异(P>0.05)。就干物质采食量来说，枯草芽孢杆菌组育肥羊整个育肥期(1～60d)干物质采食量最低，分别比对照组、紫锥菊组降低了12.07％和8.87％，但3组之间差异不显著(P>0.05)。

饲粮中添加枯草芽孢杆菌和紫锥菊提取物可使育肥羊料重比在数值上降低，整个育肥期(1—60d)枯草芽孢杆菌组、紫锥菊组的料重比分别比对照组降低13.64％和6.99％，但差异不显著(P>0.05)。育肥前期(1—20d)、育肥后期(41—60d)和整个育肥期(1—60d)的料重比枯草芽孢杆菌组、紫锥菊组和对照组之间无显著差异(P>0.05)。育肥中期(21—40d)紫锥菊组料重比显著高于枯草芽孢杆菌组(P

2.2 枯草芽孢杆菌和紫锥菊提取物对育肥羊营养物质表观消化率的影响

由表3可知，枯草芽孢杆菌对营养物质的表观消化率具有显著的影响(P<0.05)，与对照组、紫锥菊组相比，枯草芽孢杆菌组干物质、粗蛋白质、粗脂肪、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维的表观消化率均显著地升高(P<0.05)。紫锥菊组与对照组相比，除了酸性洗涤纤维的表观消化率显著升高(P

2.3 枯草芽孢杆菌和紫锥菊提取物对育肥羊腹泻率的影响

由表4可知，饲粮中添加枯草芽孢杆菌和紫锥菊提取物均具有降低育肥羊腹泻率的作用，枯草芽孢杆菌组、紫锥菊组的腹泻率分别比对照组降低了50.00％和11.03％，但紫锥菊组与对照组差异不显著(P>0.05)，枯草芽孢杆菌组显著地低于对照组(P<0.05)。

2.4 枯草芽孢杆菌和紫锥菊提取物对育肥羊血清生化指标的影响

由表5可知，枯草芽孢杆菌组育肥羊血清尿素氮、白蛋白、甘油三酯和葡萄糖浓度显著低于对照组(P<0.05)，血清总蛋白、球蛋白浓度显著高于对照组(P<0.05)。紫锥菊组血清碱性磷酸酶活性、球蛋白浓度显著高于对照组(P<0.05)，血清白蛋白、尿素氮浓度显著低于对照组(P<0.05)。与紫锥菊组相比，枯草芽孢杆菌组的血清碱性磷酸酶活性及甘油三酯、葡萄糖浓度显著降低(P<0.05)，总蛋白、球蛋白浓度显著升高(P

2.5 枯草芽孢杆菌和紫锥菊提取物对育肥羊器官指数的影响

由表6可知，枯草芽孢杆菌组、紫锥菊组脾脏指数显著高于对照组(P<0.05)，枯草芽孢杆菌组肺脏指数显著高于对照组和紫锥菊组(P

2.6 枯草芽孢杆菌和紫锥菊提取物对育肥羊屠宰性能和肉品质的影响

由表7可知，各组育肥羊的屠宰率、GR值、眼肌面积和羊肉pH、粗蛋白质、粗脂肪含量均无显著差异(P>0.05)。枯草芽孢杆菌组羊肉的剪切力显著低于对照组和紫锥菊组(P<0.05)。枯草芽孢杆菌组和紫锥菊组羊肉失水率显著低于对照组(P<0.05)。枯草芽孢杆菌组和紫锥菊组羊肉熟肉率显著高于对照组(P<0.05)。枯草芽孢杆菌组羊肉水分含量显著低于紫锥菊组和对照组(P

3 讨论

3.1 枯草芽孢杆菌和紫锥菊提取物对育肥羊生长性能的影响

仇武松等报道饲粮精料中添加0.72％的枯草芽孢杆菌对湖羊平均Et增重无显著影响，但能使采食量、料重比显著降低。张志焱等在育肥羊饲粮精料中添加l％的含有枯草芽孢杆菌的酶制剂时，育肥羊平均日增重较对照组显著升高12.88％，料重比显著降低6.50％，对平均日采食量无显著影响。Upadhaya等在猪上的试验结果表明，在饲料中添加枯草芽孢杆菌使6周龄以内仔猪平均日增重显著升高，料重比显著降低，但对生长后期7～16周龄猪的生长性能无显著影响。JCrgensen等报道，枯草芽孢杆菌对28～42日龄仔猪生长性能无影响，使43～120日龄仔猪平均日增重显著升高，料重比显著降低，121～182日龄仔猪平均日增重显著降低、料重比显著升高，在整个试验期，枯草芽孢杆菌能显著提高平均日增重和料重比。Aly等研究发现，在夏季，紫锥菊可显著提高罗非鱼的体增重、特定生长率和成活率。Oskoii等研究了在虹鳟鱼饲料中添加紫锥菊对其生长性能等指标的影响，结果表明，各紫锥菊添加剂量均能提高虹鳟鱼的体增重、特定生长率，降低饵料系数，且0.5％添加量效果最佳。本试验研究结果表明，枯草芽孢杆菌和紫锥菊提取物对育肥羊平均日增重影响不显著，这与仇武松等的研究结果一致；枯草芽孢杆菌和紫锥菊仅使育肥羊料重比在数值上降低，这与其他前人的研究结果不一致，这可能是由于添加剂量或者动物种属差异造成的，后续将进行不同添加剂量的筛选试验。

3.2 枯草芽孢杆菌和紫锥菊提取物对育肥羊营养物质表观消化率的影响

微生物添加剂可以提高饲料消化率，据报道，在奶牛饲粮中添加益生素可以改变瘤胃与后段消化道的微生物数量、瘤胃发酵模式，增进营养物质的外流速度，提高营养物质的消化率和饲粮利用率。肖怡以2.4×108、2.4×109、2.4x1010CFU／(只·d)3个不同水平的芽孢杆菌添加到饲粮中饲喂肉羊，结果显示，2.4×109CFU／(只·d)芽孢杆菌的添加显著降低了肉羊干物质采食量，提高了干物质、有机物、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维、氮的表观消化率和沉积氮，并显著提高了饲粮消化能和代谢能。周盟试验结果显示，枯草芽孢杆菌能显著提高犊牛营养物质表观消化率。Noh等研究表明，饲粮中添加5％的枯草芽孢杆菌可显著提高干物质、总能和粗灰分的表观消化率。以上结果与本试验结果相似。本试验中，与对照组、紫锥菊组相比，枯草芽孢杆菌组干物质、粗蛋白质、粗脂肪、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维的表观消化率均显著地升高。这可能是枯草芽孢杆菌在在胃肠道中定植后，通过增殖能够为动物机体补充蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶等具有较强活性的酶类，降解动物体内的蛋白质、甘油三酯、非淀粉多糖、结构性碳水化物等，降解某些抗营养因子，对动物机体进行辅助消化，促进反刍动物对营养物质的消化和吸收，从而提高饲料利用率。紫锥菊对免疫性能影响方面研究较多，对营养物质的表观消化率的影响未见报道。本试验中，紫锥菊组育肥羊酸性洗涤纤维表观消化率显著高于对照组，其作用机理还需进一步研究。

3.3 枯草芽孢杆菌和紫锥菊提取物对育肥羊腹泻率、血清生化指标和器官指数的影响

枯草芽孢杆菌可以拮抗致病菌、增强机体免疫能力，在不良的环境下，以孢子形式存在，生长速度快，产酶能力强，在改善畜禽生长性能、维持动物肠道菌群平衡、提高肠道抗氧化能力及提高机体的免疫机能等方面均有较好的效果。紫锥菊中的异木聚糖和阿拉伯糖能够刺激单核淋巴细胞的增殖和巨噬细胞的活性，使巨噬细胞释放肿瘤坏死因子—α、白细胞介素—l和干扰素β等，提高非特异性T细胞的活性，促进淋巴细胞的分泌，从而增强机体免疫机能。紫锥菊具有显著的免疫刺激作用，其免疫调节作用与增强巨噬细胞和淋巴细胞功能、刺激细胞因子和抗体的产生有密切关系。枯草芽孢杆菌对牛、羊腹泻具有预防治疗作用，梁晋琼等用芽孢杆菌制剂灌服腹泻犊牛3d后，止泻率达到93.33％，灌服腹泻羔羊3d后，止泻率达到86.66％。姚维平等研究结果表明，饲粮中添加1.5％的紫锥菊制剂，可以降低断奶仔猪腹泻率。本试验饲粮中添加枯草芽孢杆菌后，与对照组相比，育肥羊腹泻率降低了50.00％，这可能是由于枯草芽孢杆菌在消化道定植后，产生多种消化酶类，补充育肥羊内源性消化酶的不足，建立胃肠道黏膜微生物防御屏障，维持胃肠道微生态平衡，同时，产生生理活性物质和抗菌物质，这些抗菌物质对细菌、病毒、真菌等都有抑制作用，提高机体免疫机能，降低腹泻率。紫锥菊组育肥羊腹泻率数值上比照组降低，但是差异不显著，这与前人在断奶仔猪上的研究结果不一致，这可能是由于本试验中紫锥菊添加量小。袁彩红研究结果证明，紫锥菊挥发油对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和大肠杆菌的最低抑菌浓度分别为2.50、1.25和0.63mg／mL，紫锥菊的抗菌作用是其含的多糖和咖啡酸等多种代谢活性物质共同作用改变巨噬细胞活性的结果。

郭军蕊研究表明，蛋鸡饲粮中添加枯草芽孢杆菌能使第2、3、4、12、16、20周血清葡萄糖浓度和第2、3、8、12、20周血清尿素浓度显著降低，第16周血清免疫球蛋白A浓度，第1和4周血清免疫球蛋白G浓度和第2、4、8周血清免疫球蛋白M浓度显著升高。李卫芬等报道饲粮中添加枯草芽孢杆菌能显著提高血清碱性磷酸酶活性，降低尿酸、胆固醇和甘油三酯的浓度。Qadis等研究结果认为含有枯草芽孢杆菌的复合益生素制剂可以提高断奶犊牛血清中免疫因子水平，增强断奶犊牛的细胞免疫功能。Sun等研究表明，纳豆枯草芽孢杆菌增加了断奶犊牛血清免疫球蛋白和干扰素γ(IFN-γ)浓度。也有报道认为，饲粮中添加地衣芽孢杆菌与枯草芽孢杆菌复合益生素对犊牛血清生化指标没有显著影响。代雪立等认为，蛋鸡饲粮中添加l％的紫锥菊复方制剂可使血清葡萄糖、总蛋白浓度和碱性磷酸酶活性显著提高，血清甘油三酯、胆固醇浓度显著降低。本试验中，枯草芽孢杆菌组育肥羊血清尿素氮、白蛋白、甘油三酯和葡萄糖浓度显著降低，总蛋白、球蛋白浓度显著升高，紫锥菊组育肥羊血清碱性磷酸酶活性、球蛋白浓度显著升高，血清白蛋白、尿素氮浓度显著降低。血清总蛋白主要生理作用为保持组织蛋白动态平衡，修补组织，维持血液pH稳定等，必要时通过氧化作用为机体提供能量，因此血清总蛋白和白蛋白浓度反映机体的营养和免疫状况，血清尿素氮浓度可以较准确地反映动物体蛋白质的代谢情况和饲粮氨基酸的平衡情况，血清尿素氮浓度降低表明氮在体内沉积增加，饲料中蛋白质利用率提高。血清甘油三酯浓度是体内脂质代谢的反映，甘油三酯浓度的降低能保证脂类正常代谢，促进动物的健康生长。碱性磷酸酶主要由成骨细胞和肝脏合成分泌，是反映骨代谢的重要指标，在骨矿化过程中发挥着积极作用。

器官发育程度主要由营养水平和品种决定，复合芽孢杆菌制剂对肉兔肠道发育具有促进作用。孙焕林研究发现，肉鸡饲粮中添加枯草芽孢杆菌能显著提高脾脏指数和法氏囊指数，紫锥菊对器官指数的影响未见报道。本试验结果显示，饲粮中添加枯草芽孢杆菌能使脾脏指数、肺脏指数显著升高，这可能是由于枯草芽孢杆菌分泌的活性抗菌物质能促进机体免疫器官成熟，使这些器官组织处于高度反应准备状态，T淋巴细胞、B淋巴细胞数量增多，提高动物机体的体液和细胞免疫水平。紫锥菊提取物使脾脏指数显著升高，紫锥菊提取物中的异木聚糖和阿拉伯糖能够刺激单核淋巴细胞的增殖和巨噬细胞的活性，提高非特异性T细胞的活性，从而增强机体免疫机能，促进免疫器官的增大。

3.4 枯草芽孢杆菌和紫锥菊对育肥羊屠宰性能和肉品质的影响

李卫芬等研究表明，肉鸡饲粮中添加枯草芽孢杆菌，能使胸肌失水率降低22.66％，肌肉亮度值、红度值和黄度值在数值上有所提高。也有报道称饲粮中添加枯草和地衣芽孢杆菌对肉鸡肌肉失水率影响不显著。紫锥菊提取物对屠宰性能和肉品质的影响未见报道。本研究结果显示，饲粮中添加枯草芽孢杆菌后，使羊肉的剪切力、失水率降低，熟肉率升高，因而对羊肉的品质具有改善作用，而紫锥菊提取物能使羊肉的熟肉率升高。

4 结论

①饲粮中添加100mg／(kg BW·d)的枯草芽孢杆菌，可以使育肥羊日采食量、料重比在数值上有所降低，显著提高干物质、粗蛋白质、粗脂肪、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维的表观消化率。

②饲粮中添加枯草芽孢杆菌可以提高育肥羊的免疫性能，降低育肥羊腹泻率和血清碱性磷酸酶活性及尿素氮、白蛋白、甘油三酯和葡萄糖浓度，提高肺脏指数、脾脏指数和血清总蛋白、球蛋白浓度。

③饲粮中添加枯草芽孢杆菌对育肥羊屠宰性能无显著影响，但对肉品质具有改善作用。

④饲粮中添加100mg／(kg BW·d)的紫锥菊提取物，使酸性洗涤纤维的表观消化率和血清球蛋白浓度显著升高，血清白蛋白、尿素氮浓度显著降低。

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