2.1.2 酵母Z4培养方法

（1）一级放大培养：配制YPD液体培养基，500mL三角瓶装200g，灭菌冷却至室温后，接活化菌种3～4环，35℃，160rpm，摇床培养至酵母数2亿个/mL。

（2）二级放大培养：取培养液200g，添加20%糖化醪和0.3%尿素（按糖化醪量算）后，装至500mL三角瓶中，接一级菌种5%，35℃，160rpm，摇床培养至酵母数>1亿个/mL。

（3）一代酵母泥菌种：取清液1L，分装2瓶，每个1000mL三角瓶装500g，接二级菌种5%，35℃，160rpm，摇床培养1d。发酵结束，将菌液放到1L量筒中静置分层3h，倒掉3/4上清液，获得一代酵母泥菌种250g，酵母数＞1亿/mL。

（4）二代酵母泥菌种：取清液1L，分装2瓶，每个1000mL三角瓶装500g，接种一代酵母泥菌种5%，35℃，160rpm，摇床培养1d。发酵结束，将菌液放到1L量筒中静置分层3h，倒掉3/4上清液，获得二代酵母泥菌种250g，酵母数＞1亿/mL。

2.1.3 乳酸菌的培养方法

（1）配置MRS液体培养基1瓶，500mL三角瓶中装200g。

（2）接10%新鲜酸奶至MRS液体培养基中，35℃，静置培养1d。

（3）培养结束，采用MRS固体培养基涂板法，在35℃，培养3d，计数菌落数。

2.2 固体饲料发酵实验

按照不同的乳酸菌添加方式分别制备4种固体饲料进行同步发酵实验，在发酵过程中观察饲料的变化情况，进行比较，发酵结束后检测饲料的水分、蛋白含量。发酵工艺如图3

2.2.1 饲料样品的发酵（1#样品）

取新鲜湿糟（水分约70%）500g放入发酵塑料盒中，添加8%豆粕，1.8%尿素，磷酸二氢钾0.05%，1%的黑曲霉F1菌液和5%的二代酵母泥菌液，添加1%的乳酸菌菌液，搅拌均匀，35℃，培养2d（辅料添加比例及接种量按湿糟的绝干重计）。

2.2.2 饲料样品的发酵（2#样品）

取新鲜湿糟（水分约70%）500g放入发酵塑料盒中，添加8%豆粕，1.8%尿素,磷酸二氢钾0.05%，添加1%的黑曲霉F1菌液和5%的二代酵母泥菌液，搅拌均匀，35℃，培养24h。发酵24h后，添加1%的乳酸菌菌液，搅拌均匀，装入密封塑料袋，35℃，厌氧发酵1d（辅料添加比例及接种量按湿糟的绝干重计）。

2.2.3 饲料样品的发酵（3#样品）

取新鲜湿糟（水分约70%）500g放入发酵塑料盒中，添加8%豆粕，1.8%尿素,磷酸二氢钾0.05%，添加1%的黑曲霉F1菌液和5%的二代酵母泥菌液，搅拌均匀，35℃，培养24h。发酵24h后，添加1%的乳酸菌菌液，搅拌均匀，35℃，好氧发酵1d（辅料的添加比例及接种量按湿糟的绝干重计）。

2.2.4 饲料样品的发酵（4#样品）

取新鲜湿糟（水分约70%）500g放入发酵塑料盒中，添加8%豆粕，1.8%尿素，磷酸二氢钾0.05%，添加1%的黑曲霉F1菌液和5%的二代酵母泥菌液，搅拌均匀，35℃，发酵培养48h（辅料的添加比例及接种量按湿糟的绝干重计）。发酵24h、48h时，搅拌物料，并观察黑曲霉、酵母生长情况，及物料的水分、气味变化。发酵结束，检测粗蛋白、乳酸菌菌数、pH。

2.3 检测方法

水分：快速水分测定仪法。

蛋白质：采用凯氏定氮法（参照国标GBT6432-1994）。

2.4 检测结果及分析

四种样品的发酵情况见表1。

为数据进行结果分析。整理如表1。

实验结果表明：

（1）发酵初始时添加1%的乳酸菌，并进行好氧发酵（1#样品）：

发酵过程，木薯渣蛋白 16.54%，物料水分维持在 56% 左右，没有发现霉菌菌丝大量生长，物料pH4.5-5.5；发酵24h，有淡淡的霉味，酵母数达10亿个/g；发酵48h，物料结块，没有乳酸味，乳酸菌未检出，酵母数达16亿个/g，产品蛋白24.79%，较原来提高了49.88%。

（2）发酵24h后添加1%的乳酸菌，并进行厌氧发酵（2#样品）：

发酵过程，木薯渣蛋白16.54%，物料水分维持在56%左右，没有发现霉菌菌丝大量生长，物料pH4.5-5.5；发酵24h，有淡淡的霉味，酵母数达14亿个/g；发酵48h，物料松散且有明显乳酸味，乳酸菌数6亿个/g，酵母数达16亿个/g，产品蛋白25.81%，较原来提高了56.04%。

（3）发酵24h后添加1%的乳酸菌，并进行好氧发酵（3#样品）：

发酵过程，木薯渣蛋白16.54%，物料水分维持在56%左右，没有发现霉菌菌丝大量生长，物料pH4.5-5.5；发酵24h，有淡淡的霉味，酵母数达14亿个/g；发酵48h，物料轻微结块，有轻微乳酸味，乳酸菌数3亿个/g，酵母数10亿个/g，产品蛋白27.68%，较原来提高了67.35%。

（4）发酵过程中没有添加乳酸菌，并进行好氧发酵（4#样品）：

发酵过程，木薯渣蛋白 16.54%，物料水分维持在 56% 左右，没有发现霉菌菌丝大量生长，物料pH4.5-5.5；发酵24h，有淡淡的霉味，酵母数达14亿个/g；发酵48h，物料结块，没有乳酸味，乳酸菌未检出，酵母数5.8亿个/g，产品蛋白24.6%，较原来提高了48.73%。

将表1所述实验数据画成折线图以便于分析，得图1。

由图1可知，物料粘度随淀粉比例的增加而增大，相同的温度和剪切速率下，淀粉比例越大物料粘度越大，且淀粉比例大于15%时，粘度随淀粉比例变化速度加快。

3 结论

综上所述，发酵过程，木薯渣蛋白16.54%，物料水分维持在56%左右，没有发现霉菌菌丝大量生长，物料pH4.5-5.5；发酵结束，添加乳酸菌的样品蛋白提高率为 50% 以上，较空白样（48.73%）高，酵母数都高于空白样，且发酵24h添加乳酸菌的样品，物料较疏松，乳酸菌数较多，有乳酸清香味，霉味较淡。

4 结论

通过本实验分析，餐厨垃圾经初步固液分离后，淀粉比例对固液分离剩余物的粘度起到很大作用，比例大于15%时现象尤为显著。所以，在餐厨垃圾固液分离剩余物的处理中，可通过适当降低浆料中淀粉比例以降低其粘度，提高固液分离效率及剩余物的处理效率。

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