4 样品采集及测定方法

4.1 产奶量测定

试验期每天测定２次，分别于4：30和17：30收集牛乳，采用美国BouMatic自动挤奶系统记录产奶量。

4.2 牛奶成分分析

于试验期第１０、２０、３０和４０天早晚按１∶１比例采集５０ｍＬ奶样盛入加有重铬酸钾的离心管中混合均匀，送往洛阳市ＤＨＩ检测中心，采用美国本特利ＬＹ－ＹＱ０００２测定仪进行体细胞测定，ＦＣＭ－１５０分析仪测定乳脂肪、乳蛋白、乳糖、非固体物质、干物质、尿素氮等指标。

4.3 乳清指标的测定

乳清指标均用上海翱艺UV－1200型紫外可见分光光度计测定。于试验期第10、20、30和40天早晚按１∶１比例每头牛各采集50ｍＬ乳样，经４℃低温离心（1000r／min，30min）取中间层，将所得乳清分装在１０个离心管，－２０℃冷冻保存待测。乳清测定指标包括：超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、总抗氧化能力（ＴＡＣ）、丙二醛（ＭＤＡ）、蛋白定量、碱性磷酸酶（ＡＫＰ）、谷丙转氨酶（ＡＬＴ）及谷草转氨酶（ＡＳＴ）。

5 数据处理

数据采用Excel进行初步整理，用 SPSS 20.0 进行单因素方差分析（one－wayANOV），采用 Duncan 法进行多重比较，数据以“平均值±标准差”表示。

结果与分析

1 杂交构树发酵饲料营养成分

杂交构树发酵饲料成熟后，茎叶清晰可见，气味芳香，质地柔软。由表2可见，相对于苜蓿草粉而言，杂交构树发酵饲料的CP、TND和NEL相当，NDF、EE、Ash与Ca的含量较高，而ADF、ADL、P含量略低。从主要营养成分指标看，杂交构树发酵饲料替代苜蓿饲喂奶牛是可行的。

2 奶牛产奶量和乳成分

奶牛产奶量和乳成分见表3。与对照组相比：试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组产奶量、乳脂率、乳蛋白率和干物质差异不显著（P＞0.05）；试验Ⅰ组乳糖率显著提高（P＜0.05），Ⅱ、Ⅲ组差异不显著（P＞0.05），但Ⅰ组较Ⅱ组提高了1.39％（P＜0.05）；试验Ⅱ组非脂固体显著降低（P＜0.05），Ⅰ、Ⅲ组无差异显著（P＞0.05）；Ⅰ组尿素氮显著降低（P＜0.05），Ⅱ、Ⅲ组有降低趋势但差异不显著（P＞0.05）；试验Ⅲ组体细胞降低了36.11％（P＜0.05），Ⅰ、Ⅱ组差异不显著（P＞0.05）。

3 奶牛乳清指标

3.1 奶牛乳清抗氧化指标

由表4可见，与对照组相比，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组ＳＯＤ均差异不显著（P＞0.05）；Ⅰ、Ⅱ组ＭＤＡ含量差异均不显著（P＞0.05），试验Ⅲ组的含量显著降低（P＜0.05）；Ⅰ、Ⅱ组ＴＡＣ均无显著差异（P＞0.05），试验Ⅲ组显著提高了47.83％（P＜0.05）。

3.2 奶牛乳清生化指标

由表5见，与对照组相比，试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组蛋白定量及ＡＫＰ均差异不显著（P＞0.05）；Ⅱ、Ⅲ组ＡＬＴ显著降低（P＜0.05），Ⅰ组差异不显著（P＞0.05）；Ⅰ组ＡＳＴ显著降低71％（P＜0.05），Ⅱ、Ⅲ组差异均不显著（P＞0.05）。

讨论

1 杂交构树发酵饲料对产奶量及乳成分的影响

产奶量是衡量奶牛生产性能的直观标准，饲喂杂交构树发酵饲料对奶牛产奶量及乳成分含量均有一定程度的积极影响，但奶量、乳脂率、乳蛋白和干物质各组间差异均不显著，这与Si等的研究结果基本一致。非脂乳固体含量是衡量牛乳营养质量的一项指标，会影响酸奶的粘稠度及保鲜度，本试验中8％添加量的试验结果与张慧敏等的非脂固体与乳糖、乳蛋白呈显著正相关研究结果略有差异，但符合不得低于8.3％的标准。

乳糖是乳中主要的碳水化合物，可以促进钙和氨基酸的吸收、调节肠道菌群。在断奶前和刚断奶的仔猪饲料中加入高浓度的乳糖可避免引发道的高渗透压，降低腹泻率。利用牛奶尿素氮含量评价奶牛日粮粗蛋白水平、能氮平衡、氮利用率、繁殖率以及诊断代谢疾病已成为奶牛科学研究的热点。有研究表明尿素氮值随产奶量的增加而升高，Broderick等研究发现尿素氮值和产奶量呈负相关，并与乳蛋白、乳脂含量均呈负相关。此外，牛奶中的体细胞是反映乳腺健康和牛奶品质的关键因素，因为这些细胞是在乳腺炎免疫反应时产生的，每毫升含有40多万体细胞的牛奶被认为不适合人类食用，到达50万则被认为是隐性乳腺炎。相关研究表明，如果将体细胞水平降低到50000个／mL，不仅能够提高牛奶产量，农场温室气体总排放强度也有可能降低3.7％。在本试验中，添加12％的杂交构树发酵饲料对降低牛奶体细胞效果明显，这与Si等研究结果相一致。此外，有报道体细胞的增加会导致脂肪和蛋白质含量增加，而牛奶产量、乳糖和尿素氮含量将明显下降，但本试验未发现此类情况，可能是由于杂交构树中的活性成分具有抗炎作用，从而避免了因炎症所导致的相关指标合成减少。Reis等在乳体细胞的差异水平研究中发现了乳脂、蛋白质和乳糖的相应变化，并且乳体细胞与乳尿素氮值之间呈正相关，Mazal等在研究中也得出了同样的结论，即当奶牛的乳房没有被感染时，体细胞和牛奶中的蛋白质含量之间可能没有联系。

2 杂交构树发酵饲料对乳清抗氧化指标的影响

牛乳中含有60种以上的酶，通过分析泌乳过程中进入乳中的酶，可以获知乳腺细胞的代谢情况，并辅助进行相关疾病的诊断，同时多种抗氧化物质的摄取对于人类预防心血管、癌症、神经等疾病具有重要意义。ＳＯＤ和ＴＡＣ是衡量生物机体内抗氧化能力的重要指标，可降低自由基对机体的毒害程度；血浆酶活性在产奶期和干奶期有显著变化，需要在产奶期对相关参数进行持续监测；脂质过氧化被认为是包括炎症在内的许多疾病的关键因素，同时导致牛奶营养价值降低；ＭＤＡ为脂质过氧化标志物，检测ＭＤＡ的浓度不仅可以判断脂质过氧化程度，还可作为乳腺炎的诊断指标。抗氧化系统能够有效地应对过氧化脂质的产生，可在ＭＤＡ中观察到巨大的个体间变异。

相关报道表明牛奶体细胞计数与ＭＤＡ正相关，与ＴＡＣ负相关，本试验与此研究结果一致。黄酮类化合物是影响杂交构树青贮饲料抗氧化活性的主要成分，随着该成份的增加，杂交构树青贮饲料的抗氧化能力得到提高。相关研究表明灌木和树木的平均ＴＡＣ水平高于草及干草，高ＴＡＣ植物的摄入可能有利于牛的ＴＡＣ状态。本试验中杂交构树青贮饲料未对奶牛乳清ＳＯＤ浓度产生影响，试验结果均在正常范围之内，这可能是由于试验周期或杂交构树青贮饲料的剂量不在适当范围内所造成的。

3 杂交构树发酵饲料对乳清生化指标的影响

ＡＬＴ、ＡＳＴ和ＡＫＰ是重要的分解酶，在动物的肝功能方面有重要作用。牛乳中的ＡＫＰ也来自中性粒细胞，在未感染乳腺炎外周血中，酶活性相对较低。当微生物侵染时，机体启动免疫防御机制的表现之一是带有ＡＫＰ活性的中性粒细胞比率增加，且在感染后第3天ＡＫＰ的活性显著提高，即ＡＫＰ活性与炎症严重程度密切相关。也有研究表明体细胞和ＡＫＰ呈极显著正相关，但本试验ＡＫＰ各组间差异不显著，这可能是由于试验时间不足或添加剂量不在适当范围内所造成的。血清转氨酶水平升高是肝脏疾病的一项指标，Liu等研究发现牛奶和血浆中血清转氨酶活性之间有显著正相关性，检测牛奶中ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＡＫＰ活性可能是监测奶牛肝功能的一种替代方法。Misle 等研究结果表明，机体内的ＡＬＴ和ＡＳＴ与牛龄正相关，而本试验所选牛胎次为２～４胎，存在一定的年龄差距，因此对本项指标或有一定影响。乳清可用作功能性食品，乳清蛋白对与氧化应激相关的疾病有治疗作用，同时有助于降低血液中转氨酶、尤其是ＡＬＴ的水平。乳清在体外试验中具有影响转氨酶的还原、抑制酶活性等作用。导致奶牛酶活性变化的原因是多方面的，本试验中检测到的ＡＳＴ差异可能与试验个体的生理阶段以及环境等因素有关，这些因素还有待进一步研究。

结论

添加8％和12％杂交构树发酵饲料可降低牛乳体细胞含量，并提高乳清抗氧化功能，杂交构树发酵饲料可作为新型木本饲料开发利用。