1.1 试验材料

绿茶茶渣由松阳县绿谷茶乡农业科技有限公司提供。活菌数为1×107CFU/g的枯草芽孢杆菌、酿酒酵母和黑曲霉由浙江大学动物科学学院饲料所提供。

以枯草芽孢杆菌、酿酒酵母和黑曲霉为发酵菌株，按照本实验室的优化工艺参数，即以70%豆粕、15%茶渣和15%麸皮为发酵底物，在温度为30℃、含水量55%的条件下发酵72h，得到生物发酵饲料。发酵饲料的营养成分见表1。

1.3 饲养管理

饲养试验在杭州市农业科学研究院畜牧所双江实验基地进行。试验期内，试验鸡只每天06:30、14:30各饲喂1次干拌料。有窗鸡舍3层阶梯式笼养，每窝位4只鸡。自由采食与饮水，每日恒定光照16h，并观察鸡只健康情况，饲养管理和免疫均按照试验场原有程序进行。

1.4 指标测定及方法

1.4.1 生产性能

试验期间以重复为单位，记录每天的喂料量、产蛋数、蛋重、破软蛋数和死亡数，以周为单位，计算每重复产蛋率、平均蛋重、平均日采食量、料蛋比、破软蛋率和死淘率。

1.4.2 蛋品质

收集试验第28天和第56天的鸡蛋，每重复5枚。用游标卡尺测量鸡蛋的纵径长和横径长，并计算蛋形指数；用千分尺测量蛋壳厚度，测量鸡蛋蛋壳3个不同位置，以其平均值作为该鸡蛋蛋壳厚度；用罗氏比色扇测定蛋黄颜色，用SONOVA蛋品质自动分析仪测定鸡蛋的哈氏单位。

1.4.3 血清抗氧化和生化指标

试验第56天早上，每重复随机选取2只鸡，空腹翅静脉采血，在4℃条件下3000r/min离心10min制备血清，-80℃保存。黄嘌呤氧化酶法测定血清超氧化物歧化酶（SOD），硫代巴比妥酸法测定血清丙二醛（MDA）含量，钼酸盐法测定过氧化氢酶（CAT），比色法测定谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）。血清中的葡萄糖、白蛋白、总蛋白、淀粉酶和脂肪酶含量均采用卓越300型全自动生化分析仪测定。上述指标测定所用试剂盒购自南京建成生物工程研究所。

1.5 统计分析

采用SPSS 19.0统计软件进行单因素方差分析（One-Way ANOVA）和独立 样本t检验，以P<0.05作为差异显著性判断标准，多重比较用 Duncan´s 法，结果以平均值 ±标准误表示。

3.1 生物发酵饲料对仙居鸡产蛋性能的影响

影响蛋鸡产蛋性能的因素很多，包括品种品系、个体差异、年龄、环境因素、生理阶段、运动强度、饲粮能量水平以及饲料添加剂等。茶渣中含有1%~2%的茶多酚，其所含有的儿茶素和黄酮类物质对蛋鸡的消化功能和鸡蛋形成过程有积极影响，黄酮类物质还可促进母鸡促黄体素雌激素和孕酮的分泌，从而使产蛋率升高。本试验中，向饲粮中添加4%发酵饲料代替豆粕可以使仙居鸡的产蛋率提高4.92%，这与许多学者的研究结果一致。Xu等采用地衣芽孢杆菌发酵豆粕，日粮中添加2.5%发酵豆粕可以使蛋鸡产蛋率提高3.59%。吴慧敏采用产朊假丝酵母、黑曲霉和枯草芽孢杆菌发酵绿茶茶渣，在蛋鸡饲粮中添加2%发酵茶渣可以显著提高蛋鸡的产蛋性能。Yang等试验发现在蛋鸡饲粮中添加4%和6%绿茶副产物可显著提高产蛋率。

本试验中，各发酵饲料组间平均蛋重和死淘率差异均不显著，这一结果与孙亚楠等和Azeke等的试验结果一致。而吴俊锋等用发酵豆粕代替蛋鸡饲粮中的豆粕，各组间死淘率差异不显著，但处理组的平均蛋重高于对照组，这可能是因为发酵饲料及其添加量、蛋鸡品种不同造成的差异。浙江仙居鸡的平均蛋重一般在42g，但本试验的仙居鸡的平均蛋重都低于42g，试验组较对照组有提高的趋势。原因可能是本试验是在7月和8月进行，天气比较炎热，导致仙居鸡采食量下降，从而影响了蛋重，也可能是由于光照时间、温度控制、通风情况等环境因素导致的。另外，浙江省仙居鸡一般采用放养，而本试验采用笼养，也可能导致仙居鸡的平均蛋重低于42g。

刘媛媛用发酵豆粕代替肉鸡饲粮中的豆粕，发现处理组肉鸡整个生长阶段的耗料增重比较对照组降低了7.58%。这与本试验结果显著降低了蛋鸡的料蛋比一致。这主要源于酵母菌和枯草芽孢杆菌菌体含有有益营养元素；其次，酿酒酵母、枯草芽孢杆菌和黑曲霉在代谢过程中会产生多种酶类和其他促生长因子；而且饲料中的有益微生物可以抑制病原菌、维持肠道微生物稳态，进而增强蛋鸡抗病力，促进生长。在整个试验期内，添加发酵饲料可以降低仙居鸡的破软蛋率。

3.2 生物发酵饲料对仙居鸡蛋品质的影响

影响蛋鸡蛋品质的因素较多，除遗传因素外，还受饲粮及蛋鸡机体健康状况的影响。本试验中，各组之间蛋形指数、蛋白比例、蛋黄比例和蛋壳比例并无差异，这是因为这4种指标受遗传因素影响较大。魏尊等研究也得到了相似的结果。蛋壳品质的优劣直接影响着蛋鸡企业的利润。钙、磷、钠、钾、锌和锰是影响蛋壳品质的主要营养素，其中锌和锰通过影响碳酸酐酶的活性和蛋壳粘多糖的合成而影响来影响蛋壳质量。4%和6%发酵饲料组蛋壳厚度显著高于对照组，这可能是由于发酵饲料中富含小肽等活性物质，这些小肽可以促进金属离子的被动吸收过程，从而增强了蛋壳厚度。也有一些研究与本试验结果不一致。张朝霞等和Kojima等发现在蛋鸡饲粮中添加茶的副产品会导致蛋壳厚度显著降低，Kaya等研究表明，随着黑茶粉添加量的提高蛋壳厚度会逐渐下降。这可能是因为茶粉内含有的单宁会阻碍钙的吸收和利用。而在本试验中，茶渣经过发酵后单宁含量可能比较低，这与朱飞等试验结果相似，黑曲霉固态发酵茶渣可显著降低茶渣中的单宁含量。

蛋黄的色泽主要取决于饲粮中类胡萝卜素和胡萝卜素的含量。本试验中，3个处理组鸡蛋蛋黄颜色均显著提高，这可能是因为茶渣中富含多种色素的缘故。Abdo等也发现随着绿茶添加量的提高，蛋黄颜色会随之逐渐加深。

哈夫单位反映蛋白的状况及鸡蛋的新鲜程度，哈夫单位越高，代表蛋白越粘稠，鸡蛋品质越好。茶渣中含有的茶多酚具有极强的抗氧化能力，可以清除机体的自由基，降低对蛋白质的损伤。本试验中，4%发酵饲料组鸡蛋的蛋白高度提高，但是4%和6%发酵饲料组的哈夫单位均显著高于对照组，这可能是因为鸡蛋重量不均匀所造成的。Biswas等和Xia等研究发现蛋鸡饲粮中添加绿茶粉显著提高了鸡蛋的哈夫单位，与本试验结果一致。

3.3 生物发酵饲料对仙居鸡血清抗氧化能力的影响

机体的健康程度与防御体系的抗氧化能力的强弱有着密切的联系，正常机体的氧化损伤与抗氧化体系处于动态平衡中，机体代谢产生的活性氧能不断被机体抗氧化防御系统清除，以维持机体稳态。该防御体系包含多种具有抗氧化功能的酶类及非酶类物质，如SOD、CAT、GSH-Px、维生素、氨基酸和金属蛋白质等。

动物在代谢过程中产生的过氧化氢可以氧化机体的生物膜系统，从而对机体造成损伤。CAT的主要作用就是将过氧化氢分解为水和氧气，从而减少其对动物机体的伤害。绿茶含有的多酚类物质具有潜在的抗氧化能力，豆粕含有的大豆异黄酮可以激活大鼠CAT的启动子，促进CAT mRNA的表达，从而达到提高CAT活性，增强机体抗氧化能力的目的。本试验中，添加发酵饲料的处理组CAT、SOD活性均显著高于对照组，GSH-Px活性也有提高的趋势，说明饲料中添加发酵饲料可以增强仙居鸡抗氧化能力。周玲玲等研究表明，发酵豆粕可以显著增强仔猪血清GSH-Px活性；吴俊峰等发现，蛋鸡饲粮中添加发酵豆粕可以提高其血清SOD活性。

机体代谢产生的自由基攻击生物膜中的不饱和脂肪酸，引起脂质过氧化，导致机体组织受损。MDA是脂质过氧化的产物，通常通过MDA含量反映动物机体的脂质过氧化程度，间接体现机体细胞受损伤程度。添加4%和6%发酵饲料于仙居鸡饲粮中可以降低其血清中MDA含量，提高机体的抗氧化能力。陈庆达等向蛋鸡饲粮中添加发酵豆粕，也得到了相似的结论。

3.4 生物发酵饲料对仙居鸡血清生化指标的影响

血清生化指标是衡量动物健康状况和生理机能等的重要指标。动物机体活动所需要的能量大部分来源于葡萄糖，正常情况下蛋鸡血液中葡萄糖稳定在一定水平以保证机体能量的供给。本试验中，添加生物发酵饲料的处理组血清葡萄糖水平与对照组并无显著差异，表明发酵饲料对仙居鸡血清葡萄糖含量影响不大，与黄静等向胡须鸡中添加发酵桑叶粉并未显著改变其血清葡萄糖水平的结果一致。

血清中的总蛋白是血清中白蛋白和球蛋白的总和。血清中总蛋白和白蛋白含量可反映机体的营养状况和蛋白质的吸收与代谢状况，其含量增加表明肝脏活动增强，蛋白质的合成代谢加强。本试验结果表明，在饲料中添加6%发酵饲料可以显著提高仙居鸡血清白蛋白水平，表明饲料中添加发酵豆粕可以提高蛋白质在仙居鸡体内的沉积率，与郭军蕊等在海兰褐壳蛋鸡中添加1.0×108CFU/g枯草芽孢杆菌可以显著提高其血清白蛋白水平的结果一致。

本研究中，随着发酵饲料添加量的提高，仙居鸡血清总蛋白含量增加，但与对照组差异不显著，与柯祥军等向肉鸡日粮中添加发酵豆粕可提高血清总蛋白含量的试验结果相似。消化酶是对消化道中食物降解有促进作用的特殊蛋白质，主要包括蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶。动物肠道中的消化酶活性反映其消化能力的强弱，决定了对饲料的利用效率。本试验中，发酵饲料组的淀粉酶和脂肪酶都有提高的趋势，与林丽花等添加发酵豆粕可以提高肉鸡的消化酶活性的结果一致。