4、饲养管理与样品采集

试验鱼暂养2周后,挑选大小基本一致、鳞片完整且采食正常的斜带石斑鱼270尾,初始体重为12.6g,随机放入9个体积为100cm×60cm×80cm的网箱中,每个网箱30尾。将9个网箱同置于一个长方形水泥池中,随机分成3组,每组3个网箱（重复）。饲养试验持续8周,每天08:00和16:00进行饱食投喂,每2d进行1次吸粪,养殖水源为过滤海水,水温22.5-30.0℃,溶解氧浓度大于5.7mg/L。

养殖试验结束后,经过24h禁食,将每个网箱的试验鱼分别捞出称重,每个网箱随机捞取6条鱼用MS-222麻醉,尾静脉采血,全血（01%肝素钠抗凝）收集在离心管中,离心（2500m/min）10min后收集血浆,于-80℃冰箱保存；采血后解剖取肝脏称重后于-80℃冰箱保存。

5、指标测定

5.1 生长性能指标

根据试验所测定和记录的数据计算增重率（weight gain rate,WGR）、特定生长率（specific growth rate,SGR）、摄食率（daily feeding intake,DFI）饲料效率（feed efficiency ratio,FER）、肝体比（hepaticsomatic index,HSI）、成活率（survivalrate,SR）。生长性能指标的计算公式如下：

增重率（%）=100×（Wt-W0）/W0；

特定生长率（%/d）=100×（lnWt-lnW0）/t；

摄食率（%/d）=100×Wf/（Wt/2+W0/2）/t；

肝体比（%）=100×W1/Wt；

成活率（%）=100×Nf/Ni。

式中:W0为试验鱼的初始体重（g）；Wt为试验鱼的终末体重（g）；Wf为摄食饲料的总量（g）；W1为肝脏重量（g）；t:为投喂天数（d）；Ni为试验初始鱼尾数；Nf为试验终末鱼尾数。

5.2 血浆生化指标

血浆碱性磷酸酶（AKP）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）活性与总胆固醇（T-CHO）、总蛋白（TP）含量采用相应试剂盒测定,试剂盒购于南京建成生物工程研究所。

5.3肝脏抗氧化指标

肝脏过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）活性以及丙二醛（MDA）含量采用相应试剂盒测定,试剂盒购于南京建成生物工程研究所。肝脏蛋白质含量采用喹啉酸（BCA）法蛋白质定量测试盒测定,测试盒购于南京建成生物工程研究所。

6、数据处理与分析

试验数据用平均值±标准误（mean±SE）表示。采用SPSS 20.0软件进行数据统计和分析,先对数据进行方差齐性检验,如满足方差齐性条件则对数据进行单因素方差分析（one-way ANOVA）,若组间存在显著性差异,则采用 Duncan氏法进行多重比较检验组间差异显著性,以P<0.05表示差异显著。

结果

1、饲料中添加不同水平的发酵银杏叶对斜带石斑鱼生长性能的影响

由表2可知，包含增重率、特定生长率、肝体比在内的各生长性能指标在各组之间均没有显著差异（P>0.05）。

2、饲料中添加不同水平的发酵银杏叶对斜带石斑鱼血浆生化指标的影响

由表3可知,饲料中添加0.25%或0.50%发酵银杏叶对斜带石斑鱼血浆中AKP活性与T-CHO、TP含量均无显著影响（P>0.05）。与对照组相比，饲料中添加0.25%发酵银杏叶对血浆中AST活性没有产生显著影响（P>0.05）,但添加0.50%发酵银杏叶则使血浆中AST活性显著下降（P<0.05）；此外,饲料中添加0.25%或0.50%发酵银杏叶均可显著降低血浆中ALT活性(P<0.05)。

3、饲料中添加不同水平的发酵银杏叶对斜带石斑鱼肝脏抗氧化指标的影响

由表4可知,添加发酵银杏叶的2个试验组的肝脏SOD活性均显著高于对照组(P<0.05),且肝脏SOD活性有随发酵银杏叶添加水平增加而升高的趋势;肝脏GSH-Px活性随着发酵银杏叶添加水平的增加而显著升高(P<0.05);肝脏CAT活性在发酵银杏叶添加水平为0.50%时达到最高,显著高于未添加发酵银杏叶和发酵银杏叶添加水平为0.25%时（P

讨论

逯岩等发现在团头鲂饲料中添加0.25%或0.50%发酵银杏叶均能够显著提高团头鲂幼鱼的增重率与特定生长率,并可降低饲料系数。而在本试验中,在斜带石斑鱼饲料中添加0.25%或0.50%发酵银杏叶,对其增重率、特定生长率、摄食率与成活率均未产生显著影响。Tan等在石斑鱼的高脂饲料中添加0.05%～0.40%银杏叶提取物并未显著改变其增重率、特定生长率、摄食率与成活率,与本试验结果类似。这可能是由于石斑鱼属于肉食性鱼类,饲料中会添加高比例的鱼粉来提高饲料中蛋白质的品质,使得石斑鱼的生长性能达到较高水平,再提高较难,这说明发酵银杏叶在石斑鱼上呈现出的主要作用可能在于提高免疫能力或抗氧化能力方面,并且在0.25%与0.50%添加水平下不会对其生长性能产生负面影响。

血液中T-CHO的含量能够在一定程度上揭示鱼体脂类代谢的情况,反映肝脏的健康程度,当鱼体脂肪代谢紊乱、肝脏受到损伤时,血液中T-CHO的含量往往会升高,Yan等研究发现,银杏多糖能够抑制非酒精性脂肪肝引发的代谢紊乱；Jeong等研究表明,银杏叶提取物有减少脂类在肝脏过度沉积的作用；Tan等在珍珠龙胆石斑鱼的高脂饲料中加入0.05%-0.20%银杏叶提取物后,显著降低了血液中甘油三酯（TG）、T-CHO与肝脏粗脂肪含量；而本试验中,在斜带石斑鱼饲料中添加0.25%或0.50%发酵银杏叶后,相比对照组,肝体比有降低的趋势,血浆T-CHO含量有所下降,且有随着添加水平的增加而降低的趋势,但差异均未达到显著水平,可能是本试验中各试验饲料中碳水化合物、粗脂肪等营养成分含量适中,故未形成显著差异。此外,本试验发现,饲料中添加发酵银杏叶有降低中血浆AKP活性、T-CHO与TP含量的趋势,表明发酵银杏叶中的活性成分有影响机体蛋白质合成与脂肪代谢的作用,降低无机磷源的吸收与营养物质的转运效率，如果过量添加可能会影响鱼体正常的生长发育。

AST与ALT是肝脏内的2类重要的转氨酶，在氨基酸的代谢中起重要作用,当肝细胞结构受到破坏时,AST与ALT作为肝细胞的胞内酶,进入到血液中,所以血液中AST与ALT的活性可以代表肝脏的健康状态。张硕等的研究发现药用植物所含的黄酮类化合物具有抗四氯化碳（CCl4）致小鼠肝纤维化的作用，能够显著降低小鼠血液中AST与ALT活性,而黄酮类化合物又是发酵银杏叶中的主要成分之一。本试验中,在斜带石斑鱼饲料中添加0.25%的发酵银杏叶时,血浆中AST活性相对对照组略有下降而ALT活性则显著降低,发酵银杏叶添加水平为0.50%时,血浆中AST与ALT活性相对对照组均显著降低,说明发酵银杏叶具有维持斜带石斑鱼肝脏细胞正常结构与功能的作用,但同时也降低了氨基转移活力,这也是添加发酵银杏叶未能提高斜带石斑鱼生长的原因之一。

机体中的SOD能够催化超氧阴离子（O2-）歧化为过氧化氢（H2O2）和氧气（O2）；GSH-Px是一种在还原过氧化物过程中起重要作用的酶,能够降低过氧化物对机体的伤害；体内产生的H2O2经过CAT催化分解或利用,避免氧化损伤；MDA是具有细胞毒性的物质,是体内过氧化过程的最终产物,其含量的升高反映体内抗氧化能力。曹建等的研究表明,银杏叶有降低血液MDA含量与提升SOD活性的作用；太海燕等的研究发现,银杏叶提取物可以通过降低肝脏MDA含量缓解小鼠的急性酒精性肝损伤,Niu等的研究表明在肉鸡饲粮中添加发酵银杏叶可以提升肝脏GSH-Px和SOD活性,从面提高肉鸡肝脏的总抗氧化能力。本试验数据显示,摄食添加发酵银杏叶饲料的斜带石斑鱼,其肝脏SOD、GSH-Px、CAT活性显著高于对照组，MDA含量显著低于对照组,且0.50%添加水平较0.25%添加水平作用更为明显,表明发酵银杏叶对于提升斜带石斑鱼清除自由基能力与抗氧化能力有显著作用,这可能是银杏叶中的有效生物活性成分黄酮类、银杏多糖与萜类内酯化合物共同发生作用的结果,其具体机制还有待进一步研究。

在我们前期的离体试验中发现,发酵银杏叶对H2O2诱导的斜带石斑鱼肝细胞损伤具有显著的保护作用,能够显著降低细胞上清液中AST与ALT的活性,并显著提高细胞GSH-Px活性与总抗氧化能力,显著降低细胞MDA含量,本试验结果进一步印证了离体试验的结果。

结论

饲料中添加发酵银杏叶并未对斜带石斑鱼的生长性能产生负面影响,还能够提高斜带石斑鱼的肝脏抗氧化能力,且添加水平为0.50%时效果优于添加水平为0.25%时。

二十余年酶菌结合发酵经验积累，更轻易成功的生物饲料发酵剂，简单好用的中草药发酵剂，在2021年11月再次升级科学地将多糖性复合菌种营养基组合运用，功能更强效果更好，但运用成本更低。

特别提醒：如果是第一次制作发酵饲料、需要发酵的原料霉变或变质较重、发酵环境温度较低（低于15℃）、粗纤维较高、需要加快发酵速度或者需要制作出更加香醇高品质的生物发酵饲料出来等情况，请按照本产品说明书使用量增加2-3倍的使用量即可。

【原料组成】酿酒酵母、乳酸菌、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母菌、副干酪乳杆菌、曲霉菌、木霉菌、米曲霉、复合酶制剂、载体等；包装内的小塑料袋中为多糖性复合菌种营养基由多糖性糖蜜、植物性蛋白胨、酵母膏、微量元素、维生素等组成。

【产品成分分析保证值】乳酸菌、酿酒酵母等合计≥100亿cfu/g，水分＜9.0%（指包装内的粉剂部分）。

净重：500 克/袋（菌种+酶制剂300克，多糖性复合菌种营养基200克）。

请注意：本产品升级较大，与过去的使用方法有不少变化，请细看说明书进行运用。

（南宁微瑞生物科技有限公司是广西助农畜牧科技有限公司的直属下属公司）

【产品特点】

1.本产品采用以高浓度乳酸菌（300亿/g）为主要原料，结合了复合益生菌、口味改良剂、酸化剂的诸多优点，能够发酵处理各种饲料原料、青绿饲料、秸秆粗饲料、各类食品加工下脚料糟渣等成为营养丰富的饲料，且能够降解饲料中的抗营养因子，提高饲料在动物肠道中的消化吸收利用率，是降低饲料成本、改善动物肉品质、改善养殖场环境（臭味氨气下降非常明显）的好方案，使用后养殖环境形成益生菌环境，对动物健康有较好的保健作用。

2.升级后将原来的大部分辅料去掉，创新地将菌种激活和繁殖所需的专业多糖性复合菌种营养基溶于到产品中，不仅降低了大量使用红糖或玉米等含淀粉原料的使用降低成本，且明显提高了运用效果。

3.对霉变饲料及饲料原料具有脱霉作用，霉菌在厌氧发酵环境中无法生存，达到脱霉效果；对棉菜粕具有脱毒作用，通过酶制剂对抗营养因子的分解，并在发酵的过程中产生小肽。

4.产品中另外添加了新型增甜增香菌种，明显改善发酵料的适口性，使得处理后的发酵料增香增甜，动物对发酵料更爱吃。

5. 客户鉴别本产品真假和一些发酵剂产品比较效果的简单方法：500~600毫升的空塑料瓶装入50克大米，倒入200毫升不超过40℃的干净温水，加入本品粉剂与配套的多糖性复合菌种营养基各2-5克，盖上盖子摇动一下后放在温度30℃左右环境中每天几次小心放气，2～3天大米基本溶解成乳状。假冒发酵剂几乎不能溶解大米（也就是分解效果差），无大气体产生、发酵速度慢和香甜度差等，效果对比一目了然。

【产品使用方法】

一、制作液体菌液（保健菌液与加强型EM菌液）

将本品中的粉剂和多糖性复合菌种营养基溶于15公斤的温水中（不高于45℃）密封发酵72小时以上（注意放气安全），就成为酶菌结合的益生保健菌液（加强型EM菌）要求长期密封保存一年以上有效，长期在畜禽水产养殖动物上按照饲料重量的3%-5%拌入饲料中饲喂，饮水按照2%添加，动物会非常喜吃，动物各阶段（包括孕畜）均可长期使用。

二、处理全价或自配饲料成无抗饲料

本品500-1000克先放入10-20公斤温水中激活2小时以上，全价颗粒饲料1000公斤（可以加入中草药20公斤效果更好），清水600公斤，混匀后放入陶瓷或者塑料桶中严格密封，3天后开始使用。使用时发酵的全价饲料10-20%，未发酵的全价饲料80-90%，周围疫情高发期发酵的全价饲料增加到20-30%，使用后具有明显的保健效果与提高消化降低料耗的作用。

→长期在猪饲料中添加部分发酵全价饲料对比效果明显；→长期饲喂部分发酵全价饲料对猪生长、粪便臭味物质、血清抗氧化及免疫性能指标的影响

三、发酵木薯渣、豆渣、米粉面条加工下脚料、工厂学校剩饭、米糠、统糠、菌糠、酒糟、果渣果皮、青秸秆、牧草、红薯藤等原料

本品500-1000克先放入10-20公斤温水中激活2小时以上，1吨待发酵原料（部分原料需要粉碎），含淀粉类的饲料100公斤（比例约为原料的5%以上，如玉米、大米、红薯、淀粉均可，也可以用3公斤以上多糖性复合菌种营养基代替）、食盐2公斤（含有足量食盐的原料则不添加，食盐不能放在激活的菌种中，要直接撒在发酵料上或需要添加的清水中，下同）。含水量调节到55%-60%左右，压实密封发酵7天左右有浓郁香味时即可使用。发酵后的料适口性、营养、消化率较未发酵前有明显提升。发酵后的饲料根据不同动物与不同饲养周期按照10%-50%与该动物其他全价饲料混合后饲喂，不可以单独饲喂或全部饲喂发酵饲料。

四、霉变的饲料及饲料原料脱霉

每1吨霉变饲料或饲料原料添加本品2包（1000克）先放入20公斤温水中激活2小时以上，玉米粉400公斤（霉变原料中含有能量饲料如玉米粉、小麦粉等20%以上可无需另外添加玉米粉，也可以用5公斤以上多糖性复合菌种营养基代替），均匀混合后将物料含水量调节至60%左右，密封发酵7-15天后（夏短冬长，气温低于15度时建议在室内进行保温发酵）,发酵料有浓郁甜酒香味即可使用。脱霉后的饲料按照饲料比例的30%左右与饲养动物的全价饲料混合后饲喂，不可以单独饲喂。

→用99多功能饲料发酵剂对霉变的饲料及饲料原料脱霉技术

五、对棉粕、菜粕、菜粕、棕榈粕、花生枯、茶枯的脱毒与生成小肽

本品500克先放入10公斤温水中激活2小时以上，1吨待发酵原料，玉米粉100公斤（也可以用3公斤以上多糖性复合菌种营养基代替）、食盐2公斤。含水量调节到55%左右密封发酵一周以上。本产品不仅能够快速去除棉粕、菜粕、菜粕、棕榈粕等其中的抗营养因子（俗称其中的毒素），形成生物蛋白饲料代替豆粕提高消化吸收率，还能够在发酵过程中生成大量对动物有益的的小肽。

→菌酶协同发酵豆粕工艺的优化

→发酵豆粕营养价值及其在猪生产中的应用

→利用发酵豆粕代替鱼粉对断奶仔猪产能和肠道细菌的影响试验。

六、中草药及中药渣发酵方法

1.固态中草药发酵技术：将100公斤中草药粉碎，越细越好放入80公斤的35℃左右的温水中，加入玉米粉（也可以用750克以上多糖性复合菌种营养基代替）与豆粕各10公斤、本品1包先放入10公斤温水中激活2小时以上、食盐200克，放入塑料容器内压实密封发酵7天以上后使用，密封可以保存一年以上，按照饲料比例的1%以上添加到饲料或饮水中使用。

2.液态中草药发酵技术（即发酵成为中草药活菌水的方法，操作视频见下面）：1.5-2公斤中草药（如“御瘟汤”）+1包本品先放入10公斤温水中激活2小时以上+10公斤全价饲料（可以用750克以上多糖性复合菌种营养基或2公斤以上红糖代替）+100公斤清水混合在非金属容器中简单密封发酵72小时以上后使用（在半个月内使用完效果更好，且要持续密封保存，否则时间一长可能变质不能使用）。按照5%-10%的比例添加到动物饲料中饲喂，或2%-5%的比例添加的动物饮水中饲喂。

3.中药渣发酵：中药渣1立方，本品1包先放入10公斤温水中激活2小时以上、玉米粉100公斤（也可以用3公斤以上多糖性复合菌种营养基代替）、豆粕50公斤（花生粕、菜粕、茶粕等均可），食盐3公斤，混合含水量调节在55%-60%左右，装入大容器或薄膜袋中压实密封发酵，一般一周左右有浓郁的甜酒香味即可使用，密封可以保存一年以上。发酵后的中药渣按5%以上的比例添加到饲料中。

七、制作轻度全量发酵饲料及水料上的运用

本品500克先放入10公斤温水中激活2小时以上、全价饲料1000公斤、清水600-800公斤混合发酵6-24小时后饲喂，形成轻度全量发酵预消化模式；或者清水增加到1500公斤以上形成水料发酵24小时内饲喂，两种模式能够达到更好的消化吸收率。

八、制作优质的青贮饲料

将本品1包先放入20公斤温水中激活24小时以上备用，制作青贮饲料时比较均匀地喷洒到3-5立方物料中，能够加速发酵、提高质量和适口性，且不容易失败还能够更长时间保存。

【配料说明和注意事项】

1、将本品（粉剂与包装内的稠状物质）放入约20倍的温水中化开2-24小时活化后再使用效果更好；在发酵物料时一定要压实密封，环境温度低于20℃建议适当保温或延长发酵时间；制作液体菌剂和密封发酵饲料过程中会产生气体注意放气安全；密封好不开封的情况下发酵料可以保存1年以上不变质。密封效果不好会导致发酵料表面霉变，饲喂时要铲除表面霉变的发酵料。

2、发酵料如果酸度过大，动物适口性差时可以在饲喂前混料时添加1%-2%小苏打中和酸度，改善动物适口性，或者降低发酵饲料的使用量。

3、发酵料开封进行饲喂后，建议7天内使用完，每次取料后要注意继续进行密封保存。

4、发酵料由于营养不全面，建议在饲喂混料时添加适当的能量饲料和蛋白饲料、预混料来调节营养配比，使动物达到更佳的饲喂效果和生长速度。

5、动物第一次饲喂发酵料必须遵循先少量饲喂然后逐步加量的原则，一般幼小阶段动物最大添加量10%-20%，中等阶段动物20%-30%，邻近出栏阶段30%-40%。在实际饲养中行适当的调整。                                             

6、第一次使用发酵饲料可能会出现零星或者短时间的腹泻，这些都属于正常的现象。可以通过减少发酵料和添加药物进行调整。连续使用发酵料一周后会发现动物的消化率大大的提高，粪便变松软而且量变少，栏舍的氨臭味大大的减低。

7、饲喂本产品及发酵饲料不影响正常的动物免疫，动物发生疾病使用大剂量抗生素药物时，继续使用本品和发酵饲料无副作用，母畜与孕畜也可以使用。 

【包装规格】500克/包（菌种+酶制剂300克，多糖性复合菌种营养基200克，市场售价约25元/包），30包/箱。规模养殖场可以提供25公斤装或者进行产品定制。

【质保与储存】12个月，常温下于通风、阴凉、干燥处存放。

【生产企业】南宁微瑞生物科技有限公司

厂家地址：广西南宁市高新区科园大道58号

联系电话：400-030-9099，0771-2204816、3800156

微信公众：gxzn-99，网址：www.zn99.com，www.fjc001.com

淘宝网gxzn99.taobao.com（广西助农科技养殖超市）。

申请代理与经销联系13507889320（微信同号）；咨询了解当地经销代理商或微信直接购买产品请添加18076549930或15578100088为好友（还可以咨询技术问题）。

广西助农畜牧科技有限公司有7个专业现代生态养殖技术实战型团队，为全国养殖场进行非洲猪瘟防控技术、现代循环生态养殖场的规划、设计、建设、整改等服务；养殖场环保问题低成本解决方案（养殖场恶臭、氨气，苍蝇、污水、粪污资源化、病死动物无害化处理）与专业配套产品。帮助政府部门完成现代生态养殖、粪污资源化、病死动物无害化处理、粮改饲、秸秆综合利用、牧草产业等达标工作、培训工作（免费且有专业资料等），针对您当地制定专业方案，做出示范样板后确定效果再进行推广。

广西助农畜牧科技有限公司提供全方位支撑

广西助农公司有着20余年的生物发酵饲料经验，能够针对你的养殖场做出最适合的模式，我们的发酵技术不仅设施投资简单（仅需塑料袋或塑料容器等即可），且发酵成功率很高。最关键是制作出来的发酵饲料品质比一般更好（得益于先进的酶菌结合发酵剂与经验总结），能够为你生产出低成本、养殖环保无抗优质的动物产品出来，大量成功案例可以验证。提供上门服务（快速解决家禽养殖上的疾病、环保、肉品质等问题）。

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相关链接——农业农村部鼓励企业和研发机构加快生物饲料、酶制剂、益生菌、植物提取物等抗生素替代产品开发，推动全行业抗生素减量替代，确保畜禽产品质量安全